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羊精液冷冻技术

点击数:    更新时间:2014-3-15    

 精液冷冻保存是人工授精技术的一项重大革新。它解决了精液长期保存的问题,使精液不受时间、地域和种畜生命的限制,极大限度的发挥和提高优良种公羊的利用率,加速品种的育成和改良步伐。同时,对优良种公羊在短期进行后裔测定,保留和恢复某一品种或个体公羊的优秀选精特性,以及在进行血统更新、引种、减低生产成本等方面具有重要意义。

一、采精

    用假阴道按常规方法采集精液。采精频度,一般采用连续采精2天,休息1天。在采精当日可连续采2次)(间隔10-15分钟)。原精液的活力要求不低于0.8以上。操作规程与常规人工授精相同。

二、稀释

(一)冷冻精液稀释液的配制

 1、颗粒精液的配方

    9-2号液:I液,取10克乳糖加双重蒸馏水80毫升,鲜脱脂奶20毫升,卵黄20毫升;II液;取I液45毫升,加葡萄糖3克,甘油5毫升。

 2、安瓶精液配方

    葡3-3液:I液,取葡萄糖3克,柠檬酸钠3克,加双重蒸溜水至100毫升,取溶液80毫升,加卵黄20毫升;II液,取I液44毫升,加甘油6毫升。

 3、细管精液配方

    取葡3-3液I液94毫升,加甘油6毫升,再加硒60毫克。

    以上各种稀释液每100毫升另加青霉10万牧业,链霉素100毫克。所用的稀释溶液(卵黄除外)需过滤并在水溶中煮沸消毒,甘油单独水汽消毒。稀释液现配现用。

(二)稀释比例

    最终稀释比例(精液于稀释液之比):颗粒精液为1:1,安瓶精液和细管精液为1:3。

(三)稀释方法

    颗粒精液及安瓶精液采用两次稀释法,细管精液采用一次稀释法。

    一次稀释法:按稀释比例要求,一次稀释并分装和封口,裹8层纱布置3-4度冰箱内降温平衡3小时。

    两次稀释法:先以不含甘油的I液将精液稀释至最终浓度比例的50%,尔后裹8层纱布置3-4度冰瓶或广口瓶内降温平衡(颗粒精液为1-2小时,安瓶、细管精液为2-3小时)后,再用与1液等量的含甘油的II液组第二次稀释。

    精液采出后应尽快稀释,如使用多只公羊的混合精液,或采精时间过长时,需对先采的精液进行预稀释(先加少量的稀释液)每次稀释都应在等温下(精液与稀释液等温)下完成。

三、分装与冷冻

(一)分装封口

     1、在玻璃安瓶或塑料细管上加印精液纺号及冷冻日期等标记。

     2、安瓶精液,经第二次稀释后的精液,立即在3-4度下进行分装(1毫升安瓶)和火焰封口。

     3、细管精液:用5毫升注射器,在室温下分装于0.25毫细管内,并随即用塑料珠或聚乙烯醇粉封口。细管精液不宜过满,封口后中间应保留一定空隙,以防解冻时细管爆裂。

(二)冷冻

    1、颗粒精液

    干冰法:用特制扎孔器或普通玻璃棒在预先摊平,压实的干冰上戳上排列整齐圆光的小孔(直径0.4厘米,深2-2.5厘米)再用滴管吸取稀释混匀的精液,按0.1毫升容量逐穴滴冻,经4-5分钟即可拣取,存放于液氮中。

    液氮法:先将液氮注入12磅广口保温瓶内,随后放置漂浮冷冻器(系用泡沫塑料及120目铜纱自制而成,直径15厘米,高3厘米),铜网面保持低于保温瓶口2-3厘米,以地温温度计测试温度,随时调节漂浮冷冻器铜网与液氮面的距离(约3厘米),确保铜网面温度保持在-80C左右,用滴管吸取精液,按每粒0.1毫升滴冻。加盖停留4分钟后浸入液氮,用小勺收取。精液分批冷冻,第二批滴冻前,需用干纱布将铜网面擦净。

      2、安瓶精液

    葡3-3安瓶精液,由直径25厘米,深20厘米的铝筒,周围加5厘米厚保温材料并固定在特制木箱里的液氮槽和一个直径18厘米,深3-4厘米带网眼的漂浮器制成简易冷冻器,冷冻时,向液氮槽内注入约1升液氮,将约40支安瓶精液平放入漂浮器,置于距液氮面2厘米处,停留7分钟后浸入注入液氮。

  四、解冻

(一)颗粒精液

    干种法:将颗粒放入来菌小试管中(每试管放1粒),在75C-70水浴中融化至还有绿豆粒大小时,迅速取出置于手心中轻轻擦动,借助于温度全部融化。

(二)安瓶精液

    1、葡3-3安瓶精液:取安瓶1支,置60度水浴中摇动8秒钟取出至融化。

    2、细管精液:取细管1支,置70度水浴轻摇8秒钟取出至全部融化。

       冷冻精液解冻后应随即输精。

五、输精

(一)输精制度

    1、颗粒精液,采用每日1次试情,3次输精法。即当日发情母羊于早晚用输精器多输精1次,翌日早晨再输精1次。

    2、安瓶及细管输精:采用每日1次试情,2次输精(早、晚间隔7-8小时),直至发情终止。

(二)输精标准

    1、颗粒精液,解冻后精子活率不低于0.3,输精量为0.2毫升,每一输精剂量中,含活精子数不少于0.9亿个。

    2、安瓶及细管精液,解冻后精子活率要求在0.35以上。葡3-3安瓶及细管精液输精量分别为0.3毫升和0.25毫升。每一输精剂量中含活精子数分别不得少于0.8亿个和0.75亿个。

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